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MCF7-ADR細(xì)胞|MCF7/ADR細(xì)胞系培養(yǎng)方法

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MCF7-ADR細(xì)胞|MCF7/ADR細(xì)胞系培養(yǎng)方法

細(xì)胞名稱

MCF7-ADR細(xì)胞

貨號

A006

種屬

細(xì)胞來源

ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進

生長特性

貼壁  上皮樣

培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基: 80% RPMI-1640 +20% FBS ++10ug/ml 胰島素+1000ng/ml ADR(推薦HAKATA優(yōu)等胎牛血清,貨號:HN-FBS-50)

溫度:37     氣相:95%空氣,5% CO2

傳代

  1. 75%酒精噴灑整個培養(yǎng)瓶消毒,將其平躺置于培養(yǎng)箱中進行1-3小時的緩沖,.然后置于無菌操作臺,打開瓶口,將其中的培養(yǎng)液去掉,再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基(T25培養(yǎng)瓶為例)并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據(jù)細(xì)胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進行換液以及傳代,一般23天換一次液;

2.待細(xì)胞長至80-90%時,需要對其進行傳代,推薦傳代比例為1:21:4;

3傳代步驟:將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°預(yù)熱,倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,往培養(yǎng)瓶中加入3-5 ml PBS,輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1-2 ml預(yù)熱好的胰酶,置于37°孵育消化(次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察,以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細(xì)胞脫落為zui佳消化時間,記錄zui佳消化時間,以便于下次消化),消化好后加入3ml*培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞,使之*脫落,然后收集細(xì)胞懸液,1200rpm離心5min,棄上清,加入*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,進行傳代。

保存

凍存條件:80%*培養(yǎng)基+10%FBS+10%DMSO

(備注:建議使用本公司的冷凍液(H-W-100),4度保存的冷凍液直接重懸細(xì)胞,不能預(yù)熱后使用。)

保存條件:液氮存儲

供應(yīng)限制

僅供研究之用

常見問題及解決方案

1.培養(yǎng)瓶有破裂,培養(yǎng)液有漏液:細(xì)胞極大可能會污染,所以我們會及時安排幫老師解決。

2.收到細(xì)胞后盡快更換為含 20%血清的新鮮培養(yǎng)基,如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基,請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加 20%的血清(原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間zui長不宜超過 24 小時)

3.細(xì)胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。1-2小時后觀察,如細(xì)胞大部分又貼回瓶底,表明細(xì)胞活力正常,剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉,留8-10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察,細(xì)胞生長至匯合度80%,進行消化傳代;如細(xì)胞還是不貼壁,將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶,原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),中間注意觀察,我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo),直到問題解決。

 

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