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小鼠腎腺癌細(xì)胞的培養(yǎng)方法及注意事項
小鼠腎腺癌細(xì)胞的培養(yǎng)方法及注意事項概述如下：
在培養(yǎng)小鼠腎腺癌細(xì)胞時，首先需要準(zhǔn)備適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，通常使用的是DMEM（高糖）培養(yǎng)基，并添加10%的胎牛血清（FBS）以及必要的抗生素，如青霉素和鏈霉素（P/S），以防止細(xì)菌污染。細(xì)胞應(yīng)在含有95%空氣和5%二氧化碳的培養(yǎng)箱中，于37℃恒溫條件下進(jìn)行培養(yǎng)。
收到細(xì)胞后，應(yīng)首先檢查細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否破損，培養(yǎng)液是否有漏出或渾濁現(xiàn)象。確認(rèn)無誤后，用75%的酒精對培養(yǎng)瓶表面進(jìn)行消毒，然后將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中靜置24小時，使細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定。在顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%90%時，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
傳代時，應(yīng)先棄去舊的培養(yǎng)基，用不含鈣、鎂離子的PBS溶液潤洗細(xì)胞12次。然后加入適量的胰酶消化液，置于培養(yǎng)箱中消化12分鐘，待細(xì)胞大部分變圓并脫落后，加入含血清的培養(yǎng)基終止消化。將細(xì)胞懸液離心后，棄去上清液，用新的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并按適當(dāng)?shù)谋壤值叫碌呐囵B(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。
在培養(yǎng)過程中，需要注意定期更換培養(yǎng)基，通常建議每周更換2~3次。同時，應(yīng)定期觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，記錄細(xì)胞形態(tài)、密度等信息。當(dāng)細(xì)胞生長至一定數(shù)量時，可考慮進(jìn)行凍存，以便后續(xù)實驗使用。
總之，小鼠腎腺癌細(xì)胞的培養(yǎng)需要嚴(yán)格的無菌操作、適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件和定期的觀察記錄，以確保細(xì)胞的健康生長和實驗的順利進(jìn)行。
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