垂直流動免疫測定依賴于與更常見的相同的基本原理橫向流動免疫分析做了一些修改的格式。這兩種方法之間的區(qū)別是流體的垂直和橫向流動。然而，與傳統(tǒng)的橫向流動分析相比，垂直流動技術(shù)有幾個優(yōu)點，最重要的是減少了分析時間(< 5分鐘)，見表1

垂直流動免疫測定可用于快速檢測感興趣樣品中的抗原。樣品可來自廣泛的應用領(lǐng)域，如臨床、獸醫(yī)、農(nóng)業(yè)、食品、生物防御和環(huán)境行業(yè)。即使在復雜的樣品基質(zhì)中，檢測靈敏度通常也在較低的納克/毫升范圍內(nèi)。

表一。與橫向流動和其他快速流動類型測試相比，快速垂直流動技術(shù)的特點和優(yōu)勢。

垂直流動分析是如何工作的

與橫向流動一樣，垂直流動免疫測定依賴于將捕獲抗體固定在試劑墊上，將感興趣的樣品(有或沒有待檢測的抗原)施加到該試劑墊上。結(jié)合抗原的檢測隨后通過抗原特異性抗體金綴合物的結(jié)合來實現(xiàn)。該步驟完成了由捕獲抗體、抗原和最終的金綴合物組成的夾心，并產(chǎn)生直接和長期的視覺可檢測的紅色點，指示抗原的存在，圖1。

令人感興趣的是，通過使用不同類型的納米顆粒綴合探針進行檢測，可以容易地實現(xiàn)檢測的替代顏色。一個例子是抗體偶聯(lián)的金納米海膽，其在檢測中陽性檢測時將產(chǎn)生藍色點。

圖一。分析樣品中存在(A，B)和不存在(C)目標物時，使用金結(jié)合物(A)或金納米海膽結(jié)合物(B)后Miriad垂直流分析柱的外觀圖示。

垂直流式免疫分析中的多路復用能力

垂直流動技術(shù)也允許容易的多路復用。在Cytodiagnostics Inc .銷售的Miriad垂直流檢測試劑盒中，可以在5分鐘或更短時間內(nèi)同時評估單個樣品中4種目標的存在。

通過在膜上預定的位置和/或模式點樣針對不同抗原的捕獲抗體，可以容易地實現(xiàn)多重化。為了更容易觀察，這種多重化也可以與不同顏色的納米顆粒探針結(jié)合，例如使用分別具有紅色和藍色檢測顏色的金綴合物和金納米海膽綴合物。

圖二。垂直流動免疫測定中的多重檢測。左圖顯示了3個抗原中的2個(紅點)和對照的陽性檢測。右圖顯示了使用兩種不同顏色的納米顆粒探針(紅色:金納米顆粒，藍色:金納米顆粒)對兩種不同抗原的陽性檢測。