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用水浴鍋?zhàn)鲑|(zhì)粒DNA提取的實(shí)驗(yàn)方法

閱讀:2603        發(fā)布時(shí)間:2017/9/14
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實(shí)驗(yàn)方法原理 

質(zhì)粒多為一些雙鏈、環(huán)狀的DNA分子,是獨(dú)立于細(xì)菌染色體之外進(jìn)行復(fù)制和遺傳的輔助性遺傳單位。質(zhì)粒是進(jìn)行分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)操作,進(jìn)行遺傳工程改良物種等工作時(shí)zui主要的DNA載體。

提取質(zhì)粒的基本步驟分為三步:

①細(xì)菌的培養(yǎng)和質(zhì)粒的擴(kuò)增

②細(xì)菌菌體的裂解

③質(zhì)粒DNA的純化

實(shí)驗(yàn)材料        

大腸桿菌

試劑、試劑盒ris-Hcl EDTA葡萄糖 NaOHKAacNaAc異丙醇溶菌酶酚LB培養(yǎng)基

儀器、耗材超凈工作臺(tái) 培養(yǎng)箱、 搖床 恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、取液器、低溫冰箱、冷凍真空干燥機(jī)電泳儀、水平電泳槽紫外觀測(cè)儀

實(shí)驗(yàn)步驟

一、材料與試劑準(zhǔn)備

       1.  材料:大腸桿菌。

       2.  儀器:超凈工作臺(tái),培養(yǎng)箱,搖床,恒溫水浴鍋,臺(tái)式離心機(jī),取液器一套,低溫冰箱,冷凍真空干燥機(jī),電泳儀,水平電泳槽,紫外觀測(cè)儀。

       3.  試劑:

      (1)Solution I :25 mM Tris-Hcl(pH7.4),10 mM EDTA(pH8.0),50 mM葡萄糖,高壓滅菌,4℃保存。

      (2)Solution II :0.2 M NaOH, 1%SDS 現(xiàn)配現(xiàn)用。

      (3)Solution III :5 N KAc pH4.8,高壓滅菌,4℃保存。

      (4)3 M NaAc pH5.2,高壓滅菌,4℃保存。

      (5)異丙醇,溶菌酶(8 mg/ml),無(wú)水乙醇,70%乙醇,LB培養(yǎng)基,電泳試劑。

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