本生快訊——ELISA實驗中常遇到問題、產(chǎn)生原因及解決辦法

　　酶聯(lián)免疫吸附實驗，簡稱為 ELISA。ELISA 實驗是一種非常經(jīng)典的免疫學實驗。雖然歷史非常悠久了，但是還是不斷地在臨床和基礎研究中得到應用。其主要用于：免疫酶染色各種細胞內(nèi)成份的定位;研究抗酶抗體的合成;顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應;定量檢測體液中抗原或者抗體成份。BUSNEN本生小編總結了一些經(jīng)驗問題。

　　問題 1：陽性與陰性不能達到 2.1 的比值，陰性顏色太深。

　　可能的原因：陰性對照(也就是陽性對照的除目標抗原外的其它成分)中有某種成分與一抗作用。

　　解決的方法：純化抗原除去干擾成分。

　　問題 2：陽性與陰性不能達到 2.1 的比值，陽性顏色太淺。

　　可能的原因有 3 個：

　　1)一抗效價不好。 2)抗原太稀。 3)封閉時間過長。

　　解決的方法： 1)換用一抗或增加一抗用量。 2)增加抗原濃度。 3)縮短封閉時間，封閉時間一般 37 攝氏度 3 個小時，或者 4 攝氏度過夜。不能比這個更長了。

　　問題 3：增加抗原濃度，一抗?jié)舛炔蛔?，顯色反應沒有表現(xiàn)出應有的梯度。

　　可能的問題： 一抗與抗原的比例已經(jīng)飽和。

　　解決的方法： 增加一抗用量; 或在一抗用量不變的情況下減少抗原濃度做梯度。

　　問題 4：增加一抗?jié)舛?，顯色反應沒有表現(xiàn)出應有的梯度。

　　可能的原因：一抗與抗原的比例已經(jīng)飽和。

　　解決的方法：增加抗原用量;或在抗原用量不變的情況下減少一抗?jié)舛茸鎏荻取?/p>

　　問題 5：加完 TMB 顯色后顏色梯度很明顯，但加了硫酸終止反應后顏色梯度沒有那么明顯了。

　　可能的原因：硫酸可能把其它成分都炭化了。

　　解決的辦法：加少一點硫酸，參考值：50 μlTMB+35 μl 硫酸;或者采用 1M 的 HCL 作為終止液，50ulTMB+50ul1M HCL。

　　這些步驟里面，一抗和封閉是兩個關鍵。如果 ELISA 做不出滿意的結果，首先應該從這兩個方面改進。Elisa 實驗看似簡單，其實不然。別小瞧了ELISA。光是一個加樣就有很多講究。

　　ELISA 中加樣須注意如下問題：

　　吸取樣品時，加樣槍吸頭不應黏附多余的液體;加樣時不可 90 度向孔中滴加液體，這樣會導致液體殘留在吸頭上，加樣不準確! 不要將吸頭伸入孔中，一方面若接觸孔底可能壓彎吸頭，另一方面可能會將孔中的液體吹起來，加樣不準確! 正確的加樣方法應為 45 度，吸頭貼著孔壁加入，應注意： 角度太小，會使液體殘留在孔壁上，導致加樣不準確! 吸頭應當貼著管壁和液面的交界處!

　　綜上所述，Elisa 實驗看似簡單，其實還是有很多細節(jié)需要我們注意的。以上介紹了 Elisa 實驗的一些經(jīng)驗教訓，希望對大家有所幫助。

　　ELISA實驗 本生一直視質量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過硬的質量和優(yōu)良的服務來維護和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。