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單克隆抗體的肽圖分析：UHPLC 性能與表面 多孔顆粒相結(jié)合
閱讀：370 發(fā)布時間：2018-12-17| 提 供 商 | 上海斯邁歐分析儀器有限公司 | 資料大小 | 923KB |
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反相色譜 (RP) 肽圖分析是生物治療藥物分析中主要的技術(shù)，可為生物制藥產(chǎn)品提供全
面的表征。當(dāng)與質(zhì)譜儀 (MS) 聯(lián)用時，能實現(xiàn)對蛋白質(zhì)及其變異體的鑒定，確定翻譯后修
飾 (PTM) 及其位點，并確認蛋白質(zhì)序列。然而，由于蛋白質(zhì)裂解物固有的復(fù)雜性，使得
利用色譜進行肽圖分析非常具有挑戰(zhàn)性。因此，許多組織都致力于開發(fā)穩(wěn)定、可靠的肽
圖分析方法。通常而言，肽圖分析受到靈敏度低、峰形差及需要較長分離時間來達到所
需分離度的影響。
近年來，人們應(yīng)用安捷倫超液相色譜 (UHPLC) 以克服這些挑戰(zhàn)，與常規(guī) HPLC 相比，
UHPLC 經(jīng)證實具有超高分離度、更高的靈敏度，且可大大縮短分析時間。UHPLC 技術(shù)
可更詳盡地表征蛋白生物治療藥物，其通過加快流速、縮小粒徑及縮短柱長，可在更短
的分析時間內(nèi)實現(xiàn)更高的分離性能。但是，這種類型的分離對壓力要求越來越高，不能
在常規(guī)的 400 和 600 bar 液相色譜儀上進行操作，嚴(yán)重地限制了其應(yīng)用范圍。
為了解除這種限制，安捷倫引入一種 2.7 µm AdvanceBio 肽圖分析色譜柱以彌補生物治療藥物表征中的關(guān)鍵缺陷，可在常規(guī)液相色譜系統(tǒng)壓力下，實現(xiàn)快速而的肽圖分析。采用表面多孔色譜填料，AdvanceBio 肽圖分析色譜柱可在很短的分析時間和低系統(tǒng)壓力下大大改善肽圖分析，同時保持很高的峰性能和分析效率。本研究采用 AdvanceBio 肽圖分析色譜柱，在較短的分析時間內(nèi)對一種單克隆抗體 (mAb) 胰蛋白酶消化物進行 LC/MS 肽圖分析。此外還將 AdvanceBio 色譜柱及方法與一種亞 2 µm 非安捷倫 UHPLC 肽圖分析色譜柱進行性能比較。