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反相離子對色譜法分析奶粉中三聚氰胺
閱讀：952 發(fā)布時(shí)間：2019-3-27三聚氰胺（Melamine）簡稱三胺，學(xué)名三氨三嗪，別名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺。三聚氰胺含氮量為66.6％，折合成粗蛋白含量為416.27%，加入寵物飼料和牛奶中可以大幅提高蛋白質(zhì)測定表觀含量，但食用后可誘發(fā)腎衰竭并導(dǎo)致死亡，因此一直禁止在飼料和食品中使用。2007年，國內(nèi)外發(fā)生多起寵物因食用添加了三聚氰胺的寵物食品而致死的例子，大量相關(guān)產(chǎn)品被召回。2008年9月，國內(nèi)發(fā)生奶粉中三聚氰胺導(dǎo)致嬰幼兒腎結(jié)石和腎功能衰竭甚至死亡的惡性事件。
本文參考農(nóng)業(yè)部NY/T 1372-2007飼料中三聚氰胺測定方法中的樣品提取純化過程，采用反相離子對色譜法測定奶粉中三聚氰胺含量，重現(xiàn)性好，靈敏度高。
儀器概況
本實(shí)驗(yàn)使用島津Prominence LC-20A液相色譜儀系統(tǒng)。LC-20A是島津制作所投入整體力量開發(fā)的新一代液相色譜儀，具有以下特點(diǎn)：*的基本性能，輕松滿足客戶對儀器嚴(yán)格的要求；全自動(dòng)化操作，實(shí)現(xiàn)了分析的率；高度對應(yīng)網(wǎng)絡(luò)要求的綜合管理系統(tǒng)，改善分析工作環(huán)境。
本次實(shí)驗(yàn)所用儀器的具體配置為LC-20AD輸液泵，DGU-20A3在線脫氣，SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器，CTO-20AC柱溫箱，SPD-20A紫外可見檢測器，CBM-20A控制器和LCsolution色譜工作站。
分析方法
色譜柱：Inertsil C8 4.6×250mm 5μm
檢測波長：235nm
流動(dòng)相：含10mM檸檬酸和10mM辛烷磺酸鈉的緩沖液(pH3.0):甲醇=7:3
流速：1mL/min
柱溫：40℃
進(jìn)樣量：10μL
洗脫方式：等度洗脫。
樣品前處理方法
參考農(nóng)業(yè)部NY/T 1372-2007飼料中三聚氰胺測定方法中的樣品提取純化過程，并進(jìn)行適當(dāng)修改，具體步驟如圖1所示。
圖1 前處理步驟
分析結(jié)果
1.保留時(shí)間與峰形
圖2為本方法檢測三聚氰胺標(biāo)樣的典型色譜圖（樣品濃度為1μg/mL）
圖2 三聚氰胺標(biāo)樣圖譜
由圖2可見，本方法所測三聚氰胺保留時(shí)間為11.02min，峰形尖銳，對稱性好。
2.精密度
取濃度為5μg/mL三聚氰胺標(biāo)樣，連續(xù)進(jìn)樣5次，結(jié)果如表1所示。
編號 | 保留時(shí)間(min) | 峰面積(μV.S) |
1 | 11.016 | 214256 |
2 | 11.014 | 214205 |
3 | 11.014 | 214183 |
4 | 11.014 | 214292 |
5 | 11.013 | 214189 |
Average | 11.014 | 214225 |
%RSD | 0.01 | 0.022 |
表1 保留時(shí)間與峰面積的重現(xiàn)性
由表1結(jié)果可見，本方法測定三聚氰胺具有很好的精密度和重現(xiàn)性。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線
取標(biāo)準(zhǔn)品，用緩沖液稀釋成濃度為0.5μg/mL、1.0μg/mL、5.0μg/mL、50μg/mL、100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，分別進(jìn)樣，得到校準(zhǔn)曲線(見圖3)。
圖3 校準(zhǔn)曲線
結(jié)果表明，該方法線性良好，相關(guān)系數(shù)為0.9999。
4.加標(biāo)回收率
取奶粉空白樣品，分別加入不同濃度的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)工作液，使其三聚氰胺終含量分別為0.5mg/kg，5mg/kg，結(jié)果如下：
圖4 空白奶粉
圖5 空白奶粉添加0.5mg/kg三聚氰胺
圖6 空白奶粉添加5mg/kg三聚氰胺
扣除空白奶粉后的加樣回收率結(jié)果如表2所示。
加樣量(mg/kg) | 計(jì)算結(jié)果(mg/kg) | 回收率 | 平均回收率% |
0.5 | 0.55 | 96 | 110 |
0.64 | 114 | ||
0.67 | 120 | ||
5.0 | 4.68 | 95.8 | 96.0 |
4.80 | 94.6 | ||
4.95 | 97.6 |
表2 2個(gè)不同濃度樣品回收率
5.檢測限和定量限
用軟件計(jì)算出奶粉中三聚氰胺含量檢測限為0.026mg/kg，定量限為0.079mg/kg。
6.實(shí)際樣品分析結(jié)果
按本方法測定某品牌的奶粉，得到的圖譜如圖7所示。兩份重復(fù)樣品中測得三聚氰胺的濃度分別為19.1和19.2mg/kg，重現(xiàn)性良好。
圖7 某品牌陽性樣品檢測結(jié)果
結(jié)論
本方法定量限為0.079mg/kg，具有靈敏度高和重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，適用于奶粉中三聚氰胺含量的準(zhǔn)確測定，特別是低含量樣品的檢測。