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“隔壁的實(shí)驗(yàn)室又發(fā)文章了，我們困在處理數(shù)據(jù)這一環(huán)，這幾家的試劑盒檢測(cè)數(shù)據(jù)怎么都不一樣？"小編每當(dāng)聽(tīng)到這句話(huà)，每次感受都不同。對(duì)那些努力鉆研數(shù)據(jù)的學(xué)者表示深深的同情。那么，造成試劑盒檢測(cè)數(shù)據(jù)不一樣的原因，除了一些實(shí)驗(yàn)操作、實(shí)驗(yàn)環(huán)境等客觀因素外，還有試劑盒質(zhì)量參數(shù)，如重復(fù)率、批內(nèi)差、批間差、線性區(qū)間、準(zhǔn)確度（回收率）等。但是，最重要的影響因素可能是作為定量標(biāo)尺的標(biāo)準(zhǔn)品。所以，下面我們就揭曉影響不同ELISA試劑盒檢測(cè)數(shù)據(jù)的差異和關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)品的幾點(diǎn)疑惑。

定量ELISA試劑盒如何進(jìn)行校準(zhǔn)？

利用國(guó)際機(jī)構(gòu)的參考試劑進(jìn)行校準(zhǔn)

目前，定量ELISA試劑盒校準(zhǔn)方法為應(yīng)用NIBSC/WHO推薦的參考試劑（reference reagent）對(duì)試劑盒的定量單位進(jìn)行校準(zhǔn)。例如，WHO Reference Reagent，Islet Cell Antibodies， NIBSC code: 97/550。其單位規(guī)定為：每安瓿為20單位胰島細(xì)胞抗體（Islet cell antibodies）；或每安瓿為100單位抗GAD65；或每安瓿為100單位抗IA-2。

 

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精準(zhǔn)定量的基石之一：嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)品生產(chǎn)

   市售ELISA試劑盒的檢測(cè)指標(biāo)呈多樣化態(tài)勢(shì)，至今已知的測(cè)定項(xiàng)目種類(lèi)雖遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于NIBSC/WHO推薦的參考試劑，但只有嚴(yán)格遵守參考試劑的定量單位所生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)品（如前文提到的英國(guó)國(guó)家生物制品檢定所NIBSC提供的參考試劑）才是生產(chǎn)高質(zhì)量定量ELISA試劑盒的前提條件之一。但是不同廠商的技術(shù)路線和品控標(biāo)準(zhǔn)不同，會(huì)導(dǎo)致成品的性能存在差異，進(jìn)而造成檢測(cè)數(shù)據(jù)的差異。RSR公司的自身抗體ELISA檢測(cè)試劑盒在標(biāo)準(zhǔn)品生產(chǎn)中每個(gè)環(huán)節(jié)，嚴(yán)格監(jiān)控是否符合以NIBSC參考試劑定標(biāo)的質(zhì)控范圍，因此保證售出的RSR試劑盒定量準(zhǔn)確，高特異性，結(jié)果可重復(fù)性高。

 

精準(zhǔn)定量的基石之二：高度純化重組蛋白

     目前，國(guó)內(nèi)外的雙抗原夾心法ELISA試劑盒所用抗原大多數(shù)屬于純化的重組蛋白抗原，競(jìng)爭(zhēng)法ELISA則更加多樣化，既可能為純化的重組蛋白抗原，也可能為天然蛋白抗原提取物。對(duì)此，有些實(shí)驗(yàn)者擔(dān)憂(yōu)試劑盒中的抗原為何不使用天然蛋白，重組蛋白是否會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果？ELISA試劑盒選擇純化重組蛋白為抗原的主要原因：

 

第一，天然蛋白均存在于復(fù)雜的生物樣本中，大多數(shù)在細(xì)胞或組織中表達(dá)量可能極少，不適于進(jìn)行高度純化或者純化成本高昂，無(wú)法獲得大量的天然蛋白。

第二，為保證ELISA試劑盒檢測(cè)中抗體和抗原的特異性結(jié)合，在研究之初，通過(guò)篩選不同重組蛋白，使樣本中的抗體與重組蛋白抗原間的親和力和特異性達(dá)到最佳。

第三，隨著蛋白表達(dá)和純化技術(shù)的發(fā)展，高度純化的重組蛋白和天然蛋白具有很高的活性相似度，特別是采用真核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)，如酵母或昆蟲(chóng)細(xì)胞等，高度純化的重組蛋白具有更接近自然狀態(tài)的空間構(gòu)象和生物活性。

 

精準(zhǔn)定量的基石之三：科學(xué)生物樣本驗(yàn)證

       隨著國(guó)內(nèi)生物技術(shù)的發(fā)展，自主研發(fā)蛋白表達(dá)純化、抗體制備等ELISA試劑盒開(kāi)發(fā)技術(shù)也在不斷進(jìn)步。除了應(yīng)用NIBSC/WHO推薦的參考試劑對(duì)試劑盒進(jìn)行校準(zhǔn)外，也可用一些暫無(wú)機(jī)構(gòu)認(rèn)可，但背景信息完整的生物樣本進(jìn)行驗(yàn)證。按照科學(xué)研究方法，采用不同種屬、性別、生命周期階段、種類(lèi)等因素的生物樣本分別進(jìn)行驗(yàn)證。

 

如何正確使用ELISA試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)品？

       ELISA試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)品需要與其他試劑盒主要組分和待測(cè)樣本達(dá)到相同實(shí)驗(yàn)條件。請(qǐng)?zhí)崆?/span>30分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫(20-25℃)，如果試劑盒需分多次使用，請(qǐng)僅取出本次實(shí)驗(yàn)所需的酶標(biāo)板條和試劑，剩余板條和試劑需按照條件保存。

       RSR ELISA試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)品可直接使用，無(wú)需現(xiàn)用現(xiàn)配，且保存條件與試劑盒一致即可。

 

RSR研發(fā)總部