影響哺乳動(dòng)物原代細(xì)胞復(fù)蘇的因素包括：（a）細(xì)胞類型，（b）生長(zhǎng)階段，（c）細(xì)胞處于細(xì)胞周期的哪個(gè)階段，（d）終懸液中的細(xì)胞數(shù)量和濃度。可通過優(yōu)化以上因素來提高復(fù)蘇細(xì)胞活力， 另外，還需考慮凍存保護(hù)劑的特性以及凍存過程的具體操作。
哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)其他細(xì)胞和微生物的污染特別敏感，例如 Hela 細(xì)胞。由于這種特性，初始細(xì)胞系可通過同工酶分析、染色體組型分析、免疫分析或基因組分析，檢測(cè)來源。凍存前后均應(yīng)該進(jìn)行如上檢測(cè)。特別需要注意的是，病毒和支原體污染。 一套完整健全的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系鑒定程序應(yīng)該包括，檢查是否存在細(xì)菌、真菌、病毒、支原體、甚至原生生物原代細(xì)胞的污染。

哺乳動(dòng)物細(xì)胞準(zhǔn)備凍存時(shí)，需要將細(xì)胞調(diào)整到合適生長(zhǎng)狀態(tài)， 確保既能得到足夠的復(fù)蘇細(xì)胞又無大量非必需生長(zhǎng)的細(xì)胞。對(duì)大部分哺乳動(dòng)物細(xì)胞來說，*起始細(xì)胞數(shù)為 106-107/ml 左右。為方便加入等體積的凍存保護(hù)劑（2× 凍存保護(hù)劑 + 培養(yǎng)基），細(xì)胞懸液濃度應(yīng)以起始濃度的兩倍準(zhǔn)備?；蛘撸部蓪⒊恋砑?xì)胞重懸在凍存 保護(hù)劑（1× 凍存保護(hù)劑 + 培養(yǎng)基）中達(dá)到預(yù)期細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞操作應(yīng)該溫和小心，確保原代細(xì)胞在凍存前是健康的。盡量避免劇烈吹打及 高速離心。適當(dāng)情況下，可注入 5% 或 10% CO2 來調(diào)節(jié) pH。