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簡單！新一代固相金屬離子親和填料問世！

閱讀：1608 發(fā)布時間：2019/10/10

什么是磷酸化蛋白質(zhì)

蛋白質(zhì)磷酸化是指在激酶催化作用下把ATP或者GTP的磷酸基團(tuán)（P04）轉(zhuǎn)移到不同種類的氨基酸上（主要包括絲氨酸S、蘇氨酸T、酪氨酸Y），從而使蛋白質(zhì)發(fā)生翻譯后修飾的過程。該修飾是蛋白質(zhì)翻譯后修飾（PTM）中為重要的形式，具有顯著的生物學(xué)功能，細(xì)胞增殖和凋亡，良性發(fā)育，信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，新陳代謝，腫瘤發(fā)生等過程都有磷酸化蛋白質(zhì)的插足，研究磷酸化蛋白質(zhì)對探究生物學(xué)病變機(jī)理有著非常重要的意義。

富集磷酸化蛋白質(zhì)重要性

磷酸化蛋白質(zhì)具有低豐度和高動態(tài)性的特點(diǎn)，因此對磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)研究首先需要對磷酸化蛋白樣品進(jìn)行富集，降低樣品復(fù)雜程度和提高磷酸化位點(diǎn)鑒定數(shù)目。固相金屬離子親和色譜法（IMAC）是磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)研究中常用的磷酸化蛋白質(zhì)富集技術(shù)之一。

Welchrom® Ti Poss (phosphate ester)

固相金屬離子親和填料

Welchrom® Ti Poss (phosphate ester) 是月旭科技推出的的新一代固相金屬離子親和填料，金屬離子Ti??鰲合在磷酸酯 (phosphate ester) 為配基的多級孔雜化整體材料上形成的親和填料，利用磷酸化基團(tuán)與固相化的Ti??的高親和力來富集磷酸化蛋白質(zhì)。磷酸化蛋白質(zhì)上的磷酸基團(tuán)中的三個氧原子分別與富集材料上的三個不同Ti??螯合以形成穩(wěn)定的八面體形的配位結(jié)構(gòu)，這種配位方式提供了良好的結(jié)合能力。該填料具有吸附量大、選擇性好、成本低、適用范圍廣、操作簡單特點(diǎn)。

規(guī)格參數(shù)

基架名稱	多面體低聚倍硅氧烷（POSS）作為單體所制備的多級孔雜化整體材料
粒徑范圍	幾十微米至幾百微米
結(jié)合載量	63.6 mg/g
適用樣品范圍	所有含有磷酸基團(tuán)的蛋白質(zhì)和肽段
磷酸化肽段富集特異性	97%
pH穩(wěn)定性	強(qiáng)酸、強(qiáng)堿下均可使用
化學(xué)穩(wěn)定性	常見有機(jī)溶劑下均可使用
保存條件	干燥狀態(tài)下室溫保存
通用性操作步驟	采用80% ACN/6% TFA水溶液作為富集溶液，這樣可以在富集過程中，很大程度上避免疏水性非磷酸化肽段的吸附。去除上清溶液后，依次用洗滌溶液A（50% ACN/6% TFA/200 mMNaCl）和溶液B（30%ACN/0.1%TFA）進(jìn)行洗滌，這樣可以da程度上洗去非特異性肽段。后采用100 μL 10%（wt%）的氨水洗脫吸附在材料上的磷酸化肽段。

應(yīng)用案例

（a）β-酪蛋白酶解液直接進(jìn)行分析的 MALDI TOF-MS譜圖和（b）Welchrom® Ti Poss材料富集后分析的MADLI TOF-MS譜圖

實(shí)驗(yàn)條件：0.1µg β-酪蛋白酶解液；采用80% ACN/6% TFA水溶液作為富集溶液，去除上清溶液后，依次用洗滌溶液A（50% ACN/6% TFA/200 mM NaCl）和溶液B（30%ACN/0.1%TFA）進(jìn)行洗滌，后采用100 μL 10%（wt%）的氨水洗脫吸附在材料上的磷酸化肽段。

圖a中，未經(jīng)過富集的β-酪蛋白酶解液樣品MALDI譜圖中，非磷酸化肽段的質(zhì)譜信號峰非常強(qiáng)，嚴(yán)重影響了對磷酸化肽段的辨別。而經(jīng)過Ti??-IMAC富集，從MADLI譜圖中（圖b）可以清晰的看到磷酸化肽段以及其去磷酸化肽段的信號峰，而且?guī)缀鯖]有出現(xiàn)任何非磷酸化肽段的信號峰。證實(shí)了Welchrom® Ti Poss富集對磷酸化肽段具有良好的富集能力。