細胞類型	貨號	產(chǎn)品名稱	純度	適用的染色抗體
初始Pan-T 細胞	17961 17961RF	EasySep Human Naïve PanT Cell Isolation Kit EasySep™人初始Pan-T細胞分選試劑盒	96.1±2.3%	CD3（貨號 #60011） CD4（貨號 #60016） CD8a（貨號 #60022） CD45RO（貨號 #60097）
T細胞	17951 17951RF	EasySep Human T Cell Isolation Kit EasySep™人T細胞分選試劑盒	96.7 ± 1.5%	CD2（貨號#60007） CD3（貨號#60011） CD4（貨號#60016） CD8a（貨號#60022） CD45（貨號#60018）
T細胞	19051 19051RF	EasySep Human T Cell Enrichment Kit EasySep™人T細胞富集試劑盒	95.0 - 99.0%

CAR-T免疫細胞療法-人CD4+T細胞及亞群的負選（Human CD4⁺T Cell and Subset Isolation by negative Selection）

細胞類型	貨號	產(chǎn)品名稱	純度	適用的染色抗體
CD4+T細胞	17952 17952RF	EasySep Human CD4+ T Cell Isolation Kit EasySep™人CD4+T細胞分選試劑盒	94.8 ± 2.3%	CD3（貨號 #60011） CD4（貨號 #60016） CD8a（貨號 #60022） CD45（貨號 #60018）
CD4+T細胞	19052 19052RF	EasySep Human CD4+ T Cell Enrichment Kit EasySep™人CD4+T細胞富集試劑盒	92.0 - 97.0%
靜息CD4⁺T細胞	17962 17962RF	EasySep™人靜息CD4+ T 細胞分選試劑盒	89.0 ± 5.3%	CD3（貨號 #60011） CD8（貨號 #60022） CD25（貨號 #60153）
初始CD4+ T細胞	17555 17555RF	EasySep™人初始CD4+ T細胞分選試劑盒II	96.6 ± 1.5%	CD3（貨號 #60011） CD4（貨號 #60016） CD45（貨號 #600） CD45R（貨號 #60097）
	19555 19555RF	EasySep™人初始CD4+ T細胞分選試劑盒	91.3 - 96.9%
	19155 19155RF	EasySep™人初始CD4+ T細胞富集試劑盒	91.0 - 95.0%
記憶CD4+ T細胞	19157 19157RF	EasySep™人記憶CD4+ T 細胞富集試劑盒	86.0 - 98.0%

CAR-T免疫細胞療法-人CD8+ T細胞及亞群的負選（Human CD8+ T Cell and Subset Isolation by Negative Selection）

細胞類型	貨號	產(chǎn)品名稱	純度	適用的染色抗體
CD8+ T細胞	17953 17953RF	EasySep™人CD8+ T細胞分選試劑盒	85.6 ± 4.9%	CD3（貨號 #60011） CD4（貨號 #60016） CD8a（貨號 #60022） CD45（貨號 #60018）
CD8+ T細胞	19053 19053RF	EasySep™人CD8+ T細胞富集試劑盒	84.0 -95.0%
初始CD8+ T細胞	19258 19258RF	EasySep™人初始CD8+ T細胞分選試劑盒	92.3 ± 4.0%	CD3（貨號 #60011） CD8a（貨號 #60022） CD45（貨號 #60018） CD45R（貨號 #60097） CD56（貨號 #60021）
初始CD8+ T細胞	19158 19158RF	EasySep™人初始CD8+ T細胞富集試劑盒	85.0 - 92.0%
記憶CD8+ T細胞	19159 19159RF	EasySep™人記憶CD8+ T細胞富集試劑盒	72.0 - 92.0%	CD3（貨號 #60011） CD8a（貨號 #60022） CD45（貨號 #60018） CD45R（貨號 #60097）

以上產(chǎn)品適用處理PBMC ，1 x 10⁹個細胞。

文獻版CAR-T免疫細胞療法-細胞分選產(chǎn)品

文獻	疾病	靶點	CAR-T細胞工程	細胞分選產(chǎn)品	貨號
1	常見肝癌HCC（hepatocellular carcinoma ）	HCC特異性分泌蛋白抗原（alpha-fetoprotein ，AFP）	——	EasySep™ Human T Cell Isolation Kit	17951 17951RF
2	多種腫瘤：carcinomas, neuroblastomas and leukemias等	多種腫瘤	表達自然殺傷細胞受體1（NCR1 ，natural cytotoxic receptor 1）	EasySep™ Human T Cell Isolation Kit	17951 17951RF
3	——	抗原A激發(fā)CAR的表達，抗原B激活CAR T細胞	雙受體系統(tǒng)，組合	RosetteSep™ Human CD4+ T Cell Enrichment Cocktail and RosetteSep™ Human CD8+ T Cell Enrichment Cocktail	15022，15062和 15023，15063
4	實體瘤	——	CD4+T細胞激發(fā)系統(tǒng)免疫	EasySep™ Mouse T Cell Isolation Kit	19851 19851RF

1.Liu H et al. (2017) Targeting alpha-fetoprotein(AFP)-MHC complex with CAR T-cell therapy for liver cancer. Clin Cancer Res 23(2): 478-88.

2.Tal Y et al. (2014) An NCR1-based chimeric receptor endows T-cells with multiple anti-tumor specificities. Oncotarget 5(21): 10949-58.

3.Roybal KT et al. (2016). Precision tumor recognition by T cells with combinatorial antigen-sensing circuits. Cell 164(4): 770-9.

4.Spitzer MH et al. (2017). Systemic immunity is required for effective cancer immunotherapy. Cell 168(3): 487-502.

說明

1.RF：貨號后加RF，比如17951RF，代表RoboSep™試劑盒：包含EasySep™分選試劑盒、RoboSep™緩沖液和1-2盒RoboSep™槍頭。

2.分選試劑盒和富集試劑盒的主要區(qū)別：分選試劑盒是富集試劑盒的更新版，實驗耗時更少。

CAR-T免疫細胞療法配套產(chǎn)品

品牌	貨號	產(chǎn)品描述
StemCell	18000	EasySep Violet Magnet無柱免疫磁珠分選磁極
StemCell	10981	ImmunoCult™-XF T Cell Expansion Medium 無血清T細胞擴增培養(yǎng)基
StemCell	20144	EasySep™ Buffer
TAKARA	T100B	RetroNectin®Recombinant Human Fibronectin Fragment 重組人纖粘連蛋白，和激發(fā)型CD3單抗共同刺激T細胞增殖
TAKARA	T100A

CAR-T免疫細胞療法產(chǎn)品：CD3-CD28激發(fā)型單抗用于CAR-T細胞培養(yǎng)

品牌	貨號	產(chǎn)品描述
Gibco	11131D 11132D 11161D	Dynabeads® Human T-Activator CD3/CD28
PeproTech/BioGems	05121-25-500	Anti-Human CD3 mAb （克隆號OKT3）
PeproTech/BioGems	10311-25-500	Anti-Human CD28 mAb（克隆號CD28.2）
StemCell	10971	ImmunoCult™Human CD3/CD28 T Cell Activator
StemCell	10970	ImmunoCul™Human CD3/CD28/CD2 T Cell Activator

CAR-T免疫細胞療法—背景

十月底，諾華的CTL019之后，F(xiàn)DA公布Kite公司的Yescarta CAR-T免疫細胞療法成為FDA認證的第二個基因療法。自從Emily Whitehead帶來癌癥治愈新希望后，CAR-T免疫細胞療法再次穩(wěn)固了它免疫細胞療法領(lǐng)域的中心地位。

CAR-T免疫細胞療法流程

1、從癌癥病人身上獲取T細胞。

2、利用基因工程技術(shù)給T細胞加入嵌合抗體。

3、體外培養(yǎng)，大量擴增CAR-T細胞。

4、擴增好的CAR-T細胞輸回病人體內(nèi)。

CAR-T免疫細胞療法的T細胞來自外周血（PBMC）。臨床研究表明，T細胞進行亞群分選后的CAR-T療效更好。諾華和Kite的 CAR-T 產(chǎn)品使用的都是固定比例的 CD4+/CD8+T 細胞⁴。

CAR-T免疫細胞療法—T細胞分選

用于CAR-T基因改造的人外周血T細胞的選擇依據(jù)^1,2：

1.初始細胞比效應(yīng)細胞好。

Nature 3月的CAR-T綜述總結(jié)了選擇合適的人外周血T細胞亞群有利于臨床治療。

圖a：T細胞亞群的分化：TN到TCM細胞仍保有自我更新能力。選擇分化程度較低的初始T細胞（TN），記憶T細胞（TSCM或TCM）而不是分化末端的效應(yīng)T細胞用于基因改造可能會帶來更大治療效應(yīng)。

2.固定T細胞各亞群的比例

而由福瑞德·哈金森癌癥研究中心(Fred Hutchinson Cancer Research Center)主導(dǎo)的一項臨床實驗的進展是使用固定比例的CD4+/CD8+T細胞（NIH：NCT01865617，CD4：CD8=1：1）。

CAR-T免疫細胞療法應(yīng)用

五大類³

B淋巴細胞惡性腫瘤（B cell malignancies），急性骨髓性白血?。╝cute myeloid leukemia），非霍奇金淋巴瘤（Hodgkin lymphoma），T cell malignancies，骨髓瘤（myeloma），實體瘤（solid malignancies）。

以CD19（代表：諾華的CTL019）為靶點的適應(yīng)癥⁴

非霍奇金淋巴瘤、急性淋巴細胞白血病、慢性淋巴細胞白血病、霍奇金淋巴瘤。

參考文獻：

1.Therapeutic T cell engineering.Michel Sadelain, et al.

2.CD19 CAR–T cells of defined CD4+:CD8+ Composition in adult B cell ALL patients.Turtle CJ,et al.

3.Chimeric antigen receptor T cell therapy: 25 years in the making.Saar Gill,et al.

4.CAR-T療法正從臨床試驗階段走向產(chǎn)業(yè)化.魏巍.

CAR-T免疫細胞療法產(chǎn)品資料由紅榮微再編輯整理。紅榮微再（上海）生物工程技術(shù)有限公司以“傳遞科學(xué)價值，服務(wù)科學(xué)研究”為宗旨，主營：干細胞、醫(yī)療、細胞治療、器官再生四大板塊的產(chǎn)品。

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