主要用途

真菌/酵母細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧高質(zhì)熒光測(cè)定試劑是一種旨在通過(guò)透膜熒光染色劑氯甲基二氯二氫熒光素二乙酯，在細(xì)胞氧化條件下，產(chǎn)生熒光，來(lái)定量檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧族的生成和增加的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種實(shí)驗(yàn)用真菌/酵母菌株細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧的分析。可以被用于細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、衰老和代謝等的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)易，活體檢測(cè)，性能穩(wěn)定，滯留持久，熒光清晰。

產(chǎn)品內(nèi)容

清理液（Reagent A）     80毫升

染色液（Reagent B）    100微升

稀釋液（Reagent C）     20毫升

溶解液（Reagent D）     10毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)    1份

保存方式

保存染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，嚴(yán)格避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于真菌/酵母染色的容器

載玻片：用于染色觀察

微型臺(tái)式離心機(jī)：用于沉淀真菌/酵母細(xì)胞

培養(yǎng)箱或恒溫水槽：用于染色孵育

比色皿：用于熒光定量分析

（共聚焦）熒光顯微鏡：用于細(xì)胞熒光分析

細(xì)胞流式儀：用于細(xì)胞熒光分析

熒光分光光度儀：用于細(xì)胞熒光定量分析

實(shí)驗(yàn)步驟

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的染色液（Reagent B）置于手心融化。然后移出5微升染色液（Reagent B）到新的1.5毫升離心管，加入995微升稀釋液（Reagent C），混勻后，標(biāo)記為染色工作液，置入冰槽里。然后進(jìn)行下列操作。

1． 準(zhǔn)備好1毫升新鮮的酵母菌液（OD600＝1至2；1 X 10⁷細(xì)胞/毫升）

2． 移入到1.5毫升離心管

3． 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為1000g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）

4． 小心抽掉上清液

5． 加入1毫升預(yù)冷的清理液（Reagent A），混勻

6． 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為1000g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）

7． 小心抽掉上清液

8． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟5至7一次

9． 加入1毫升含有染色液（Reagent B）和稀釋液（Reagent C）的染色工作液，混勻（注意：參見(jiàn)注意事項(xiàng)7）

10． 放進(jìn)28℃培養(yǎng)箱里或恒溫水槽孵育20分鐘，避免光照

11． 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為1000g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）

12． 小心抽掉上清液

13． 加入1毫升預(yù)冷的清理液（Reagent A），混勻

14． 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為1000g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）

15． 小心抽掉上清液

16． 加入500微升預(yù)冷的清理液（Reagent A），混勻

17． 放進(jìn)冰槽里

18． 選擇下列方式之一進(jìn)行操作：

a) 即刻進(jìn)行細(xì)胞流式儀分析：波長(zhǎng)488nm氬離子激光，觀察50000個(gè)細(xì)胞以上――

波峰右移，表明活性氧族（ROS）含量高

b) 或使用（共聚焦）熒光顯微鏡觀察（定性檢測(cè)）：

1）移取5微升上述細(xì)胞懸液到載波片上，蓋上蓋玻片

2）激發(fā)波長(zhǎng)490nm，散發(fā)波長(zhǎng)530nm――

綠色熒光增強(qiáng)，表明活性氧族（ROS）含量高

c) 或使用熒光分光光度儀檢測(cè)（定量檢測(cè)）：

1）移取500微升上述細(xì)胞懸液到1毫升比色杯

2）加入500微升溶解液（Reagent D）

3）上下傾倒混勻數(shù)次

4）放進(jìn)熒光分光光度儀：激發(fā)波長(zhǎng)490nm，散發(fā)波長(zhǎng)530nm――

RFU增高，表明活性氧族（ROS）含量高

注意事項(xiàng)

1． 本產(chǎn)品為20次操作

2． 操作時(shí)，須戴手套

3． 操作時(shí)，避免污染母液

4． 建議染色完成后，即刻進(jìn)行熒光檢測(cè)分析

5． 孵育時(shí)，必須避免光照

6． 本產(chǎn)品染色劑不易洗掉，染色持久

7． 根據(jù)不同菌株類(lèi)型，可以調(diào)整染色工作液的使用劑量（1：100至1：1000容量比），避免過(guò)度染色

8． 本公司提供陽(yáng)性對(duì)照甲萘醌溶液（GMS12041），觀察細(xì)胞熒光增強(qiáng)現(xiàn)象

9． 本公司同時(shí)提供真菌/酵母細(xì)胞內(nèi)活性氧初級(jí)熒光測(cè)定試劑盒（GMS10016.8），滿足不同用戶需求

10． 本公司提供系列活性氧分析試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰