久久久久亚洲精品男人的天堂,日本韩国男男作爱GAYWWW,特黄AAAAAAA片免费视频,av天堂电影网

適用細(xì)胞類型：哺乳動物細(xì)胞（CHO、NS0、CD-hybridoma 細(xì)胞系）

樣品量要求： 
1*10 7 cell/sample，提供 2 份樣本。  

樣本收集步驟：

1） 使用細(xì)胞計數(shù)器測定細(xì)胞數(shù)量，計算出所需淬滅緩沖液的量。下圖以細(xì)胞數(shù)量1*10 7 為例； 
NOTE：①使用50ml圓錐形管一次處理樣本zui大量為8ml，如果樣本量>8ml，就分開做；②淬滅過程時間敏感，兩個人操作。 

2） 將 5 倍樣本體積的淬滅緩沖液加入 50ml 圓錐形管中；

3） 在低溫恒溫器上預(yù)冷淬滅緩沖液至-40℃ （淬滅緩沖液：60%（v/v）甲醇+0.85%（wt/v）碳酸氫銨（pH7.4，使用 12M 的鹽酸進行 pH 調(diào)節(jié)）。如果沒有低溫恒溫器，可以使用干冰代替，并用低溫溫度計檢測溫度，保證每管都處于-40℃，溫度不能過低）； 
NOTE： 由于單人操作，zui多 2 樣本/次，雙人操作，4 樣/次。保證淬滅處理迅速。因為時間要求“迅速”。 

4） 吸取 1 體積的細(xì)胞樣本（1*10 7 ），加入到盛有淬滅緩沖液的管中央。 NOTE： 溫度必須維持在-40℃左右，低于 45℃時，會導(dǎo)致細(xì)胞破碎。

5） 緩慢搖晃管子，混勻。 
NOTE： 禁止 Vortex 渦旋震蕩混勻！

6） 1000g 離心 1min； 

7） 去除上清。NOTE：當(dāng)上清被去除干凈后，繼續(xù)貼壁吸取 5s 以保證上清*被去除，因為有些上清粘在壁上，回落的話，會對后繼操作帶來負(fù)面影響。

8） 使用 200μl -80℃的甲醇將細(xì)胞重懸，并轉(zhuǎn)移到 1.5ml 的離心管中，然后用液氮冰凍；

9） -80 度凍存。足量干冰寄送。  

注意事項： 

1）淬滅緩沖液 pH 值要在每次適用前重新測定調(diào)整。

2）溫度要控制好，強烈建議使用-40℃冰柜操作。  

參考文獻： 
Sellick C A, Hansen R, Stephens G M, et al. Metabolite extraction from suspension-cultured mammalian cells for global metabolite profiling.[J]. Nature Protocol, 2011, 6(8):1241-9.