 | 重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司 |
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紅細(xì)胞裂解液使用方法
閱讀：6843發(fā)布時間：2014-5-6
使用說明：
對于組織細(xì)胞樣品：
1. 新鮮組織經(jīng)過膠原酶或胰酶等消化處理，通過適當(dāng)方法分散成細(xì)胞懸液，離心棄上清。
2. 加入3-5倍細(xì)胞體積的紅細(xì)胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2分鐘。例如細(xì)胞沉淀的體積為1ml，則加入3-5ml的紅細(xì)胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。
3. 400-500g離心5分鐘，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
4. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會影響后續(xù)的一些檢測。
5. 洗滌1-2次：加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，重懸沉淀，400-500g離心2-3分鐘，棄上清。可再重復(fù)1次，共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應(yīng)至少為細(xì)胞沉淀體積的5倍。4℃離心效果更佳。
6. 根據(jù)實驗需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計數(shù)等后續(xù)實驗。
對于組織細(xì)胞樣品無需洗滌的快速操作步驟：
1. 新鮮組織經(jīng)過膠原酶或胰酶等消化處理，通過適當(dāng)方法分散成細(xì)胞懸液，離心棄上清。
2. 對于0.2ml細(xì)胞沉淀加入1ml紅細(xì)胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2分鐘。本步驟在室溫或4度操作均可。
3. 加入15-20ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，混勻。
4. 400-500g離心5分鐘，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
5. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會影響后續(xù)的一些檢測。
6. 根據(jù)實驗需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計數(shù)等后續(xù)實驗。
說明：對于常規(guī)步驟，多一步洗滌過程中的離心，但可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好
一些，同時不需要大體積的離心管?？焖俨襟E少了一次離心，但洗滌效果略差一些，同時需要大體積的離心管。
對于血液樣品：
1. 取新鮮抗凝血，400-500g離心5分鐘，離心棄上清。
2. 加入6-10倍細(xì)胞體積的紅細(xì)胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2分鐘。例如細(xì)胞沉淀的體積為1ml，則加入6-10ml的紅細(xì)胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。注意：對于鼠的血液，裂解1-2分鐘已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至4-5分鐘，并且裂解過程中宜適當(dāng)偶爾搖動以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。
3. 400-500g離心5分鐘，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
4. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會影響后續(xù)的一些檢測。
5. 洗滌1-2次：加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，重懸沉淀，400-500g離心2-3分鐘，棄上清?？稍僦貜?fù)1次，共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應(yīng)至少為細(xì)胞沉淀體積的5倍。4℃離心效果更佳。
6. 根據(jù)實驗需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計數(shù)等后續(xù)實驗。
注意：對于微量或少量的血液樣品，可以在*步中不進(jìn)行離心棄上清的操作，直接在第二步中加
入10倍血液體積的紅細(xì)胞裂解液，并在室溫或4℃裂解4-5分鐘。對于鼠的血液，裂解4-5分鐘已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至10分鐘，但通常不宜超過15分鐘，并且裂解過程中宜適當(dāng)偶爾搖動以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。后續(xù)步驟相同。
對于血液樣品無需洗滌的快速操作步驟：
1. 每1ml新鮮抗凝血中加入10ml紅細(xì)胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解4-5分鐘。本步驟在室溫或4度操作均可。注意：對于鼠的血液，裂解4-5分鐘已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至10分鐘，但通常不宜超過15分鐘，并且裂解過程中宜適當(dāng)偶爾搖動以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。
2. 加入20-30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，混勻。
3. 400-500g離心5分鐘，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
4. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會影響后續(xù)的一些檢測。
5. 根據(jù)實驗需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計數(shù)等后續(xù)實驗。
說明：對于常規(guī)步驟，多一步洗滌過程的離心，但可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更一些，同時不需要大體積的離心管?？焖俨襟E少了一次離心，但洗滌效果略差一些，同時需要大體積的
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