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抗體捕捉生物測(cè)定法檢測(cè)IL—12
閱讀：501 發(fā)布時(shí)間：2012-5-5IL-12由B細(xì)胞產(chǎn)生，由分子量分別為35kD和40kD兩個(gè)亞基通過(guò)二硫鍵連接而成，其功能為誘導(dǎo)T細(xì)胞、NK細(xì)胞產(chǎn)生IFN-7；增強(qiáng)T細(xì)胞、NK細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，促進(jìn)激活的T細(xì)胞、NK細(xì)胞增殖。
利用鼠抗人IL-12McAb（可自Roche公司購(gòu)得）測(cè)IL-12濃度。
1．用包被緩沖液（pH9．5的碳酸鈉緩沖液）稀釋包被抗體為15ug／mL，在96孔酶標(biāo)反應(yīng)板，每孔加100rtl，室溫包被過(guò)夜。
2．洗滌后加封閉液（含1％BSA的磷酸鹽緩沖液）每孑L 2001uL，37℃1h。
3．在試管中稀釋IL-12標(biāo)準(zhǔn)品為1ng／mL，然后作5倍系列稀釋至8pe／mL（3管）。
4．待測(cè)樣品用*培養(yǎng)液作5倍系列稀釋3—5個(gè)稀釋度。
5．酶標(biāo)板洗滌后，分別加各稀釋度Ibl2標(biāo)準(zhǔn)品及待檢標(biāo)本，每孔100uL，每一標(biāo)本設(shè)3復(fù)孔，加100~L*培養(yǎng)液，室溫孵育2．5—3ho
6．洗5次后，加PHA激活的人淋巴母細(xì)胞懸液（終濃度為2X104／mL）100uL／孔，C02溫箱培養(yǎng)24h。
7．加3H-TdR，以下步驟同IL-2測(cè)定。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算IL-12水平。
8．注意事項(xiàng) 應(yīng)盡量使待測(cè)樣品孔的3H-TdR摻人率位于標(biāo)準(zhǔn)曲線的陡峭部分，這樣所得結(jié)果才準(zhǔn)確。此外，由于IL-12分泌細(xì)胞中有40kD多肽的過(guò)量表達(dá)，而40kD多肽無(wú)IL-12的生物活性，故并非所有的抗IL-12抗體均適用于本法。