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DNA合成儀的使用方法
閱讀：1331 發(fā)布時間：2010-12-30亞磷酰胺寡核苷酸合成為例介紹該類儀器的一般操作步驟。亞磷酰胺DNA合成的試劑有：保護堿基的5／—DMT，A、G、C、T亞磷酰胺單體，四唑偶聯(lián)催化劑，乙酐，N—甲基咪唑封閉試劑，三氯乙酸（TCA）脫保護溶液，12氧化混合物，乙腈清洗溶劑，氨水切除溶液。使用步驟如下：
1）仔細檢查合成儀上所有試劑瓶中的試劑量，必要時換掉試劑瓶，特別注意乙腈的量，因為該溶劑用量較大。
2）將標記好的清潔的收集瓶裝在合成儀上。
3）將要合成的DNA序列輸入合成儀。
4）檢查選擇的合成步驟是否正確。
5）選擇結束方法：TritylOffAuto是儀器的原始狀態(tài)，若打算以5，—DMT基團連接純化寡核苷酸，將其轉(zhuǎn)變?yōu)門ritylOnAuto結束狀態(tài)。
6）選擇結束方法，一般為系統(tǒng)的原始狀態(tài)。
7）在每個柱監(jiān)視器的Username下，輸入你所希望的保存名字。
8）以代碼代替相應的DNA序列標記每一個收集瓶。
9）打印出每一個柱設置的詳細資料。
10）檢查打印出來的資料是否正確。
11）運行StartColumn步驟檢查每一個柱的位置，確保合成儀上合成柱處于正確的位置。
12）檢查連接在合成儀上的溶劑殘留（廢液瓶）是否充滿。
13）如果分部收集器用來收集每個DMT脫保護步驟的流出物，確保試管充分清潔干凈，并打開分部收集器，確保DMT廢液管路通向分部收集器。
14）啟動循環(huán)，運行開始程序清洗試劑管路，除去原來的試劑。
注意：TritylOnAuto表示在合成寡核苷酸的5’端核苷酸帶有一個DMT，并將其從固相載體上切下來，儲存在收集瓶中；TritylOffAuto表示在合成寡核苷酸的5，端核苷酸沒有保護基團，將其從固相載體上切下來，儲存在收集瓶中；TritylOnManual表示合成寡核苷酸的5’端核苷酸帶有一個DMT，寡核苷酸沒有從固相載體上切下來，而是保留在合成柱中；TritylOffManual表示在合成寡核苷酸的5，端核苷酸沒有保護基團，寡核苷酸沒有從固相載體上切下來，而是保留在合成柱中。