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重組質(zhì)體的限制酶分析
閱讀：674 發(fā)布時間：2010-11-25儀器用具：
微量離心機
冰浴
Mupid II 迷你電泳槽及鑄膠器
UV transilluminator 及影像分析系統(tǒng)
防護面罩
藥品試劑：
限制酶：BamHI, HindIII （20 U/μL, BioLabs）
10×NE Buffer BamHI （0.1 M Tris-HCl, pH 7.9; 0.1 M MgCl2; 1.5 M NaCl; 10mM dithiothreitol）
100×BSA （10 mg/mL bovine serum albumin） 使用前稀釋十倍成10×無菌水
方法步驟：
1） 正反應(yīng)株，接種于3 mL LB/Amp 培養(yǎng)基，于37℃震蕩培養(yǎng)過夜后，以2.1 的方法抽取質(zhì)體。
2） 每一株每反應(yīng)各取3 μL 質(zhì)體，另取pQE31 及pBlueGus 每反應(yīng)各3 μL，分別依下表進行HindIII 及BamHI 切割。
3） 以1% agarose gel 進行電泳分析，由電泳圖譜挑選帶有gus DNA 片段的重組質(zhì)體。
?? 照相后的電泳膠片不要丟掉，可繼續(xù)進行Southern 轉(zhuǎn)印。
限制酶分析請依照下列表格加入：
# 各管置請于37℃反應(yīng)至少1 h。