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合成肽表位作圖法
閱讀：615 發(fā)布時(shí)間：2010-11-24在這種方法中，需合成一系列末端相互重疊的肽鏈，每段都對(duì)應(yīng)于蛋白抗原線狀序列中的一小段，并將它們排列于固相上。用檢測(cè)抗體識(shí)別這些固相肽鏈，與之結(jié)合的特異性抗體，采用酶標(biāo)記的二抗檢測(cè)。這種方法快速、成功率高。如果使用的抗體在免疫印跡反應(yīng)中效果較好，此法所得結(jié)果清晰，并能識(shí)別那些耐變性的蛋白表位。在實(shí)際實(shí)驗(yàn)中并非所有的抗體均能很好的反應(yīng)，抗體僅對(duì)那些具有耐變性特性的蛋白質(zhì)反應(yīng)較好。
系列肽鏈的設(shè)計(jì)
如果時(shí)間和經(jīng)費(fèi)都允許，合適的肽鏈應(yīng)該zui大可能地覆蓋所要作圖的表位（每段肽鏈15～20個(gè)氨基酸），而且每段肽鏈遞增1個(gè)氨基酸。這樣的系列將能對(duì)大多數(shù)抗體地作圖。因此，必須用500條肽鏈才能覆蓋具有500個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)。較為實(shí)際的做法是設(shè)計(jì)15個(gè)氨基酸長(zhǎng)，相互具有5個(gè)氨基酸重疊，或者20個(gè)氨基酸長(zhǎng)，相互具有10個(gè)氨基酸重疊的系列肽鏈。如此則只需要100條15個(gè)氨基酸的肽鏈序列或者50條20個(gè)氨基酸的肽鏈序列。如果基因片段分析已經(jīng)確定表位在100個(gè)氨基酸以內(nèi)，那么，就應(yīng)建立15—20個(gè)氨基酸的肽鏈庫(kù)。
系列肽鏈的設(shè)計(jì)
羧基末端的設(shè)計(jì)：如果要設(shè)計(jì)一套肽掃描系列，其中包括有該蛋白抗原的遠(yuǎn)端羧基末端，設(shè)計(jì)2個(gè)較短的針對(duì)羧基端的肽鏈，因?yàn)槟承┛贵w可以識(shí)別肽鏈游離的羧基。