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IPHASE/匯智和源人CYP450酶誘導(dǎo)mRNA水平檢測試劑盒(SYBR法)研發(fā)成功

檢測樣品:酶誘導(dǎo)

檢測項目:CYP450酶誘導(dǎo)mRNA水平檢測

方案概述:酶誘導(dǎo)是指細胞在底物影響下進行特定酶合成量增加的作用。藥物代謝主要發(fā)生在肝臟和腸道。其中肝臟代謝主要由位于肝細胞滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的細胞色素P450(CytochromeP450,CYP)催化,少部分由非CYP酶(如UGT酶)催化代謝。據(jù)統(tǒng)計,臨床上超過90%的藥物由CYP450酶代謝。

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更新時間2023年10月17日

上傳企業(yè)匯智和源生物技術(shù)(蘇州)有限公司

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酶誘導(dǎo)是指細胞在底物影響下進行特定酶合成量增加的作用。藥物代謝主要發(fā)生在肝臟和腸道。其中肝臟代謝主要由位于肝細胞滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的細胞色素P450Cytochrome P450CYP催化,少部分由非CYP酶(如UGT酶)催化代謝。據(jù)統(tǒng)計,臨床上超過90%的藥物由CYP450酶代謝。

 

微信圖片_20231016153500.jpg

 

PART.01    CYP450酶誘導(dǎo)機理及試驗方法

現(xiàn)已證明CYP450酶表達受孕烷X受體 (PXR)、組成型雄烷受體 (CAR)、芳烴受體(AHR)等核受體調(diào)控。3個核受體均為轉(zhuǎn)錄因子,當(dāng)與配體結(jié)合激活后,核受體會從細胞質(zhì)轉(zhuǎn)入細胞核中。其中,PXRAhR分別與細胞核內(nèi)的視黃醛X受體(RXR)和轉(zhuǎn)運蛋白(ARNT)形成異源二聚體,進而結(jié)合在相應(yīng)靶基因上(如CYP酶),調(diào)節(jié)CYP酶的表達。AhR參與CYP1A2的誘導(dǎo);PXR主要參與CYP3A4的誘導(dǎo),其次是2C亞家族;CARPXR的誘導(dǎo)譜非常重疊,此外有研究表明CAR還可以誘導(dǎo)CYP2B6。因此,在藥物早研期間,可只評估CYP1A2,CYP2B6 CYP3A4的誘導(dǎo)作用。

 

圖片2.png

 

由于CYP酶誘導(dǎo)的試驗是從轉(zhuǎn)錄、翻譯蛋白質(zhì)翻譯后修飾直至成為活性CYP酶蛋白,所以CYP酶試驗系統(tǒng)必須是肝細胞而非其亞結(jié)構(gòu)如肝微粒體或肝S9。隨后在CYP450酶誘導(dǎo)試驗時,通常需要結(jié)合酶活性和mRNA兩個水平上的結(jié)果做結(jié)論。當(dāng)僅做酶活性試驗時,若藥物同時存在酶抑制現(xiàn)象時,可能會掩蓋誘導(dǎo)作用;而測量mRNA水平則能更真實地反應(yīng)誘導(dǎo)源頭上的效應(yīng),且更為敏感,直觀地避免了酶活性檢測存在的問題。

 

鑒于此,為滿足客戶精準地了解其早研藥物的酶誘導(dǎo)作用,IPHASE技術(shù)人員成功研發(fā)CYP450酶誘導(dǎo)表達檢測試劑盒(SYBR法)!

 

PART.02    IPHASE產(chǎn)品

IPHASE作為創(chuàng)新藥體外研究生物試劑,技術(shù)人員以SYBR染料法,采用ΔΔCT-定量PCR的方式檢測CYP1A2、CYP2B6CYP3A4這三個CYP酶基因經(jīng)奧美拉唑、苯巴筆脫和利福平誘導(dǎo)后其mRNA水平的變化,發(fā)現(xiàn)其mRNA倍數(shù)變化均顯著增加,滿足藥物相互作用指導(dǎo)原則,說明IPHASECYP450酶誘導(dǎo)mRNA水平檢測試劑盒(SYBR法)能夠滿足客戶在mRNA水平上進行酶誘導(dǎo)實驗。

 

圖片3.png

 

IPHASECYP450酶誘導(dǎo)mRNA水平檢測試劑盒(SYBR法)提供給客戶提供進行qPCR試驗的擴增試劑,CYP1A2、CYP2B6CYP3A4這三個CYP酶基因以及一個內(nèi)參基因GAPDH的特異性引物。經(jīng)驗證,IPHASE所提供的特異性引物擴增效率高,且熔解曲線無雜峰,滿足客戶的試驗需求。

 

 

1.CYP1A2引物擴增效率圖

注:R2=98.4%;Eff%=106.401%

R2越接近100%擴增效率越好;Eff擴增效率越接近90%~110%越好,下同)

 

2.CYP2B6引物擴增效率圖

注:R2=98.5%;Eff%=95.791%

 

3.CYP2B6熔解曲線圖

 

4.CYP3A4熔解曲線圖

 

5.內(nèi)參基因GADPH標準曲線圖

 

IPHASE/匯智和源憑借多年的研發(fā)經(jīng)驗,推出了多領(lǐng)域、多種類的科研試劑,為藥物早期研發(fā)提供篩選工具,為生命科學(xué)領(lǐng)域的探索提供新材料、新方法和新手段,為食品、藥品、化學(xué)品等的遺傳毒性研究提供便捷產(chǎn)品,望廣大科研工作者咨詢。

 

發(fā)                    

凡使用本公司產(chǎn)品,在國內(nèi)及國際刊物上發(fā)表論文(論文發(fā)表日起一年內(nèi)),并注明產(chǎn)品屬于匯智和源/IPHASE所有,即可申請獎勵。根據(jù)發(fā)表刊物影響因子不同,給予不同金額獎品:

SCI論文及IF≤5分,500元禮品;

5分<IF≤8 800元;

8分<IF≤10 1000元;

IF≥10 2000元;

注:禮品卡也可兌換同等金額產(chǎn)品購買抵用券;

活動多多,禮品豐厚,快來參與吧!

 

關(guān)           

匯智和源,致力于為創(chuàng)新藥研發(fā)企業(yè)及生命科學(xué)研究機構(gòu)提供高品質(zhì)的生物試劑,IPHASE為公司核心品牌,品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。

 

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