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傳統(tǒng)的磁珠分選是基于抗原抗體特異性識(shí)別的原理，利用特定抗體偶聯(lián)磁珠來捕獲目的細(xì)胞。然后在高強(qiáng)度磁場作用下，將磁珠標(biāo)記細(xì)胞和沒有標(biāo)記的細(xì)胞分開。根據(jù)分選過程中標(biāo)記的細(xì)胞類型的不同，可將分選分為陽性分選（正選）和陰性分選（負(fù)選）。

陽性分選（正選）是指對目的細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記，直接獲得目的細(xì)胞。適用于比例較小的細(xì)胞群，以及從各種樣本來源中得到目的細(xì)胞，尤其是對于一些稀有樣本或者疾病來源的樣本。

◆  優(yōu)點(diǎn)：能夠獲得高純度的目的細(xì)胞，操作簡便。

◆  缺點(diǎn)：細(xì)胞被標(biāo)記了抗體和磁珠。

     陰性分選（負(fù)選）是指對非目的細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記和去除，來得到目的細(xì)胞。避免直接標(biāo)記目的細(xì)胞，從而來減少細(xì)胞活化可能，適用于比較常規(guī)的樣本，例如人外周血、小鼠脾臟等。

◆  優(yōu)勢：可以保持目的細(xì)胞未受刺激的原始狀態(tài)，得到的細(xì)胞不帶有任何抗體和磁珠標(biāo)記。

◆  缺點(diǎn)：相對陽選而言純度較低，成本較高。

那么陰選和陽選究竟應(yīng)該怎么選擇呢？

今天為您介紹的這款產(chǎn)品讓您無需迷茫，人CD8+細(xì)胞無痕分選試劑盒，兼具了陽選和陰選的優(yōu)點(diǎn)。能夠使用陽選的方式分選CD8+細(xì)胞，然后通過無痕洗脫，讓您在擁有高純度的同時(shí)，得到的細(xì)胞還不帶有任何磁珠和其他標(biāo)記。

1    原理

與傳統(tǒng)的陽選使用的特異性抗體不同，人CD8+細(xì)胞無痕分選試劑盒采用的是適配體，這是一段特異性的短鏈核苷酸序列。由于它的三級結(jié)構(gòu)，能夠通過其三維構(gòu)象識(shí)別靶標(biāo)分子，并具有很高的結(jié)合親和力（圖1）。

圖1

重要的是，這種適配體標(biāo)記是可逆的，是可以去除的。利用與適配體互補(bǔ)的寡核苷酸將細(xì)胞洗脫下來。

實(shí)驗(yàn)過程包括分選和洗脫：

分選過程，帶有磁珠的適配體與PBMC孵育，在磁場作用下，被標(biāo)記的目的細(xì)胞和沒有標(biāo)記的細(xì)胞分開（圖2a）。

圖2a

洗脫過程，帶有磁珠的細(xì)胞與適配體互補(bǔ)的寡核苷酸孵育，帶有磁珠的適配體從細(xì)胞上脫落，在磁場作用下，磁珠以及適配體和目的細(xì)胞分開（圖2b）。

圖2b

可以看出，整個(gè)洗脫過程操作非常簡單，除了磁極，無需任何其它工具，只需要加入互補(bǔ)的寡核苷酸鏈，室溫孵育10分鐘后，通過磁極分離細(xì)胞和磁珠，即可實(shí)現(xiàn)CD8+細(xì)胞的洗脫。洗脫下來的CD8+細(xì)胞不帶有任何標(biāo)記。

2    相關(guān)數(shù)據(jù)

我們一起來看看，人CD8+細(xì)胞無痕分選試劑盒的試劑應(yīng)用效果怎么樣？

| 高純度

起始樣本為新鮮提取的人的PBMC細(xì)胞，起始樣本和分選后的CD8+細(xì)胞的純度分別為23.0%和98.2%（圖3）。

圖3

| 無痕

洗脫后的細(xì)胞CD8+細(xì)胞純度≧98%，活率≧90%。整個(gè)過程細(xì)胞得率在70~90%之間。與國外某進(jìn)口品牌的陰選相比，純度更高（圖4）。

圖4

3    相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品信息                                   種屬               分選方法

CD3+ T細(xì)胞分選試劑盒          人/小鼠             陰選/陽選

CD4+ T細(xì)胞分選試劑盒          人/小鼠             陰選/陽選

CD8+ T細(xì)胞分選試劑盒          人/小鼠             陰選/陽選

 單核細(xì)胞分選試劑盒               人/小鼠             陰選/陽選

  B細(xì)胞分選試劑盒                   人/小鼠             陰選/陽選

 NK細(xì)胞分選試劑盒                 人/小鼠             陰選/陽選

CD8+細(xì)胞無痕分選試劑盒            人                無痕分選

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