猴促性腺激素釋放激素（GnRH）酶聯(lián)免疫分析
                                                   試劑盒使用說明書
本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用于測定猴血清，血漿及相關液體樣本中促性腺激素釋放激素（GnRH）的含量。
實驗原理：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中猴促性腺激素釋放激素（GnRH）水平。用純化的猴促性腺激素釋放激素（GnRH）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入促性腺激素釋放激素（GnRH），再與HRP 標記的羊抗鼠抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的促性腺激素釋放激素（GnRH）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中猴促性腺激素釋放激素（GnRH）濃度。

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試劑盒組成：
試劑盒組成48 孔配置96 孔配置保存
說明書1 份1 份
封板膜2 片（48） 2 片（96）
密封袋1 個1 個
酶標包被板1×48 1×96 2-8℃保存
標準品：45ng/L 0.5ml×1 瓶0.5ml×1 瓶2-8℃保存
標準品稀釋液1.5ml×1 瓶1.5ml×1 瓶2-8℃保存
酶標試劑3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
樣品稀釋液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
顯色劑A 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
顯色劑B 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
終止液3ml×1 瓶6ml×1 瓶2-8℃保存
濃縮洗滌液（20ml×20 倍）×1 瓶（20ml×30 倍）×1 瓶2-8℃保存
樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20 分鐘，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。
2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20 分鐘后，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PB（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100 萬/ml 左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20 分
鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟：
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10 孔，在*、第二孔中分別加標準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉，再各取50μl 分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為30ng/L， 20ng/L ，10ng/L，5ng/L，2.5ng/L。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將30（48T 的20 倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T 的20 倍）倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻37℃避光顯色15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止液后15 分鐘以內進行。

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